流式细胞术全血样本使用EDTA抗凝剂和肝素钠,肝素锂的区别

初次做流式检测全血样本细胞的朋友都需要选择合适的抗凝剂来采集保存外周血,但是BD公司流式抗体说明书写到只能用肝素钠抗凝剂,不宜用肝素锂和EDTA以及枸橼酸钠,具体原因没有进行说明,本文给各位介绍一下其中缘由,便于选购耗材。

抗凝剂真空管

抗凝剂真空管


医院里不同颜色的真空采血管使用的抗凝剂有所不同,一般绿色的是肝素抗凝管,然而现在很多医院逐步使用肝素锂替代肝素钠抗凝真空采血管了。我们采集外周血进行流式检测,推荐使用肝素抗凝,但是肝素分为肝素钠和肝素锂,很多文献都是模糊写肝素抗凝,缺乏指导价值。
不同抗凝剂的流式检测效果

不同抗凝剂的流式检测效果


上图中,对不同的抗凝剂进行了实验测试。
1.抗凝剂选择肝素钠或肝素锂,不影响Th细胞的活化和细胞因子的分泌。
2.非肝素抗凝血(如ETDA、枸橼酸钠抗凝血),可通过淋巴细胞分离液处理后,再进行刺激/阻断,仍然可以检测到细胞因子,如下图:
人EDTA抗凝血(Th1)

人EDTA抗凝血(Th1)

大鼠全血检测Th的特殊性:
a) 大鼠全血(即便是肝素抗凝)如直接用PMA/Ionomycin刺激,在后续实验过程中无法溶血,影响检测;
解决办法:使用大鼠淋巴细胞分离液提取PBMC,分离后用PMA/Ionomycin刺激。
b) 大鼠CD4在刺激后也会内陷,须用CD3/CD8反设门;
c) 目前还没有大鼠CD69抗体,也没有其他报道的可指示活化成功的指标,无法判断活化是否成功;

大鼠外周血不同抗凝剂区别

大鼠外周血不同抗凝剂区别


图:SD大鼠肝素抗凝血(A)、EDTA抗凝血(B)和枸橼酸钠抗凝血(C)经大鼠淋巴细胞分离液分离得到PBMC后,流式检测Th1。

Q:肝素锂抗凝的血样本与 BD FastImmune™实验操作兼容吗?
A:BD生物科学部门应用于“淋巴细胞的细胞因子检测”和“单核细胞的细胞因子检测”的使用说明书注明只能使用肝素钠。但是从外部使用者得到的反馈显示肝素锂抗凝的全血也可用于BD FastImmune 操作中。但是内部并未证实使用肝素锂与肝素钠的效果差异。

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